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【特别推荐】:唾液酸(SA)测定试剂使用说明、性能指标  
发布者:idrfz.chen   
 

 (本试剂仅用于科研、实验、技术支持,不直接应用于临床诊断)

【简介】

用于全自动法测定唾液酸含量。

唾液酸是细胞膜糖蛋白的重要组成部分,与生物体的许多生物学功能有关,且与细胞恶变、癌转移、浸润、失去接触性抑制、细胞粘附性降低以及肿瘤抗原性密切相关。测定血清唾液酸浓度,可作为癌肿诊断辅助性指标和疗效观察指标。

【测定方法】

神经氨酸苷酶-NANA醛缩酶偶联连续监测法

【测定原理】

第一步,样本中的结合型唾液酸经神经氨酸苷酶作用后转变为N-乙酰神经氨酸;第二步,N-乙酰神经氨酸在NANA醛缩酶作用下生存丙酮酸,生成的丙酮酸在乳酸脱氢酶的作用下使NADH脱氢氧化,监测340nm处吸光度的变化速率,与标准比较后可对样本中的唾液酸进行定量。

【试剂盒组成】

 

   

   

   

试剂

液体双试剂

试剂I: 试剂II=3:1

Tris-HCl缓冲液、神经氨酸苷酶、NANA醛缩酶、乳酸脱氢酶、NADH

适量

SA校准品

液体1ml

唾液酸、稳定剂

见标签

SA质控品

冻干1ml

唾液酸、稳定剂

见标签

【样本要求】

新鲜血清标本。样本采集后,应尽快分离血清。样本置于2~8可稳定7天,冰冻避光保存稳定6个月。

【测定步骤】

1.本试剂为液体双试剂,可直接使用。

2.测定参数:波长:340nm;光径:10mm;温度:37

3.测定方法:

加入物

测定管(U

标准管(S

空白管(B

R1 (μl

180

180

180

标本  (μl

6

-

-

标准液(μl

-

6

-

蒸馏水(μl

-

-

6

混匀,置37孵育3~5分钟,读取各管吸光度A1

R2(μl

60

60

60

混匀,置37℃延滞90秒后监测90秒内各管吸光度变化,计算每分钟吸光度变化率ΔA/min

4.上机参数:

 

37

血清+R1反应时间

180~300

样本量

6uL

340nm

试剂Ⅰ

180uL

405nm

试剂Ⅱ

60uL

血清+R1+R2反应时间

180

5.计算:

 

SAmg/dL= (ΔAU/min ΔAB/min)/(ΔAS/min ΔAB/min×准管浓度

 

【性能指标】

1 空白吸光度A1.000 空白吸光度变化速率0.030

2 线性范围 0-200 mg/dL

3 批内/分析内精密度  CV5%;批间相对极差 7%;

4 准确性  相对偏差不超过±10%。

5 抗干扰性  血清TG<8.0mmol/L、抗坏血酸<120mg/dL、胆红素<60mg/dL、血红蛋白<60mg/dL对测定结果没有影响。

6 方法对照  用本测定试剂和某进口试剂同时测定100例血清样本中SA含量,结果显示相关系数r = 0.998

【注意事项】

1、试剂变混浊或空白吸光度值<1.000时,将不能使用,应弃去;

2、建议各实验室建立自己的正常值范围;

3、试剂与样本量可根据需要按比例调节;

4、请勿用嘴直接吸取试剂,避免接触皮肤、眼睛及粘膜,一旦接触,应即用水冲洗污染部位;

5、使用配套的校准品校准,校准周期为30天,更换试剂批号时需要重新校准。建议使用正常值和病理值生化质控血清进行室内质控,测定的控制值应在确定的限制范围内,若控制值失控,实验室应采取适当的纠正措施。

【参考范围

血清 46.9-76.3 mg/dL

建议各实验室建立自己的正常参考值范围。

【储存条件与有效期】

未开封的试剂在2-8避光条件下可稳定14个月,置37℃水浴至少可稳定7天。

试剂开封后,存放在分析仪试剂仓中(2-8)的试剂在30天内性质稳定。

【参考文献】

1. Crook M. The determination of plasma or serum sialic acid. Clin Biochem. 1993; 26(1):31-38.

2. Igor A. Sobenin, et al. Optimization of the assay for sialic acid determination in low density lipoprotein. Journal of Lipid Research. 1998 (39): 2293-2295.

 

 

 

 

 

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